新生牛血清質量如何控制?
胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。
①新生牛血清應無細菌、支原體污染。血清中含有細菌會直接造成細胞污染、制品污染,因此無菌是基本的要求。另外細菌會產生內毒素,也稱脂多糖。內毒素可以引起發熱反應、白細胞反應、代謝性酸中毒、感染性休克、彌散性血管內凝血(DIC)。人及哺乳動物對內毒素異常敏感,疫苗中的內毒素含量高會引起人及動物的強烈反應,甚至被致死。所以生物制品及其原輔料對內毒素要求嚴格控制。按鱟試劑或內毒素檢測儀操作程序測定,新生牛血清中的細菌內毒素含量應低于10EU/mL。
②新生牛血清中應無牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)等外源病毒污染。含有口蹄疫病毒抗體的新生牛血清對口蹄疫疫苗的生產干擾非常大,含有牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒抗體的新生牛血清對豬瘟活疫苗(細胞源)的生產干擾非常大。其他病的抗體也需要盡可能控制,抗體存在會影響生物制品的質量。
③細胞增殖高質量的血清含有豐富的細胞生長必需的營養成分,它提供細胞貼壁所需的因子,還起著緩沖酸堿度、提供解毒、保護細胞不受傷害等作用。用Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞進行細胞增殖試驗測定標準血清(胎牛血清)的絕對克隆形成率和新生牛血清的相對克隆形成率,規定標準血清的絕對克隆形成率應不低于20%,胎牛血清的相對克隆形成率應不低于80%,新生牛血清的相對克隆形成率應不低于50%。
④新生牛血清中血清蛋白含量應在3、5%~5、0%(w/v)。新生牛出生14h內采血制備的血清,其血清蛋白含量一般都在這個范圍之內,并且,采血時間越短,測定值越接近下限,小牛出生后存活的時間越長,其血清中的蛋白含量測定值越接近上限。
⑤新生牛血清中的血紅蛋白含量應不高于0。02%(w/v)。血紅蛋白的含量直接影響血清中刺激細胞生長因子的活力。血紅蛋白含量高的血清,顏色為暗紅色,質量較差。
新生牛血清的成分
血清的成分雖然比較簡單,但是還是有很多成分沒有被破解,這也是一直讓科研人員頭痛的一件事,并且新生牛血清的成分還受供體的一些因素所影響,例如供體的年齡和生理狀況,這些都會影響血清的成分,所以研究血清成分也是一件比較復雜的工作,那么新生血清有哪些成分?
1.蛋白質
新生牛血清的服務商介紹,新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外,主要還有白蛋白,球蛋白。纖維粘連素 細胞促進細胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細胞依附;轉鐵蛋白可以結合鐵離子,減少其毒性會被細胞利用的可能。
2.多肽
血小板促生長因子能促細胞分裂,據專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員,多肽擁有著重要的作用,比如它可以促進細胞增殖因子數量的增加,不僅如此,它還能夠促成纖維細胞生長因子以及神經細胞生長因子等,據悉,雖然從數量上來看新生牛血清的含量比例少,但它能夠促進細胞的增長。
3.激素
激素對細胞的作用是多方面的,胰島素是可以促進細胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細胞分裂有關。而類胰島素生長因子能與細胞表達的胰島素受體結合,從而有胰島素同樣的作用。促生長激素:促細胞增殖效應。氫化ke的松:技術先進的新生牛血清中含有定量的該成分,它可能兼有促細胞貼附和增殖作用,但有人證明,血清中的氫化ke的松,如細胞密度高時可能有抑制細胞的作用和誘導其發生分化。
4.其他成份
新生牛血清中的氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養成分的合成培養基意義不大,與蛋白相結合狀態的微量元素對細胞培養有意義。
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