EMT6小鼠乳腺癌細胞
(1)請客戶收到細胞株產品后,立即對外包裝,細胞凍存管,細胞培養瓶等拍照,如有疑問或問題,須在24小時內通知上海信裕生物科技有限公司,提供照片和書面說明
(2.)請客戶在收到復蘇細胞后,迅速將原裝的細胞瓶放入細胞培養箱內靜置,3-4小時后,再使用傳代(注:請客戶觀看細胞狀態后。如若細胞已經長滿且貼壁好,也可靜止4小時左右后就傳代
(3.)請使用新配制的培養體系
(4.)請客戶培養細胞前三天,須對細胞生長狀態進行拍照和注明時間,若細胞生長存在質量問題,須向上海本公司提供培養生長的照片和書面說明。
(5.)請客戶仔細閱讀細胞說明書,提前準備好相應的培養體系,避免造成細胞質量問題
EMT6小鼠乳腺癌細胞
注:(1),觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
(2),瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗或無雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
(3),有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。
常見問題及解決方案
1、培養瓶有破裂,培養液有漏液:極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。 2、細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留 10ml 培養液培養觀察,細胞生長至匯合度 80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。
選擇正確的培養基:不同的細胞可能培養基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養基成分也是可能不同的。如我當時培養神經干細胞,有文獻就選用neurobase培養基,而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而這種培養基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規則搖晃均勻小心勿造成氣泡,使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。
熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質。注意更換新血清包括不同批次對細胞的影響。【細胞縮寫】" EMT-6細胞
【背景資料】 見細胞說明書
【細胞來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系
【代次】 P4
【規格】 復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)
"細胞凍存及復蘇基本知識普及:
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。
除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜DMSO,可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。
采用""慢凍快融""的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內-196℃。【細胞數】" 1*10(6)
【生物安全級別】 1
【生物體】 小鼠
【組織來源】 乳腺
【細胞形態】 上皮細胞樣
【細胞特性】 貼壁
【細胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【細胞檢測】 細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌