細胞株是科研工作中至關重要的工具,其正確使用對于實驗結果的準確性和可重復性具有關鍵意義。
細胞株的選擇是首要環節。要根據研究目的來挑選合適的細胞株。不同的細胞株具有不同的生物學特性,如腫瘤細胞株、正常細胞株、干細胞株等。如果是研究腫瘤發病機制,可能會選擇特定的腫瘤細胞株,如肺癌細胞株 A549、結直腸癌細胞株 SW620 等。這些細胞株應具備明確的來源、背景信息和已驗證的生物學特性,可通過查閱相關文獻或咨詢專業的細胞庫獲取詳細信息。
細胞的復蘇是使用細胞株的重要起始步驟。從液氮罐中取出細胞凍存管后,要迅速放入 37℃的水浴中,不斷搖晃,確保凍存液快速融化。這個過程要控制在 1 - 2 分鐘內,以減少室溫下融解過程對細胞的損傷。融化后,將細胞轉移到含有預熱培養基的離心管中,輕輕吹打均勻,然后進行離心,去除凍存液中的 DMSO 等有害物質。
培養條件的優化對于細胞株的生長至關重要。溫度通常維持在 37℃,二氧化碳濃度保持在 5%左右,這是大多數哺乳動物細胞所需的環境條件。培養基的選擇也要根據細胞株的特點來確定,不同的細胞株對營養物質、生長因子等的需求有所差異。例如,一些癌細胞株可能需要添加血清、胰島素、谷氨酰胺等特殊成分。
細胞的傳代也有一定技巧。當細胞長到 80% - 90%匯合度時,需要進行傳代。首先棄去舊的培養基,用 PBS 清洗細胞以去除殘留的血清和雜質。然后加入胰酶消化液,消化時間和溫度要嚴格控制,避免過度消化損傷細胞。當細胞變圓、彼此分離時,加入含有血清的培養基終止消化,輕輕吹打使細胞脫壁,按照適當的比例接種到新的培養皿中。
細胞的凍存同樣不可忽視。當細胞處于對數生長期時,可以進行凍存。凍存液一般由基礎培養基、血清和 DMSO 按一定比例混合而成。將細胞與凍存液充分混合后,分裝到凍存管中,做好標記,包括細胞名稱、傳代次數、凍存日期等信息。然后將凍存管逐步降溫,先放入 4℃冰箱冷藏一段時間,再轉移到 - 80℃超低溫冰箱短期保存或液氮罐中長期保存。
在整個細胞株的使用過程中,嚴格的無菌操作是必須遵循的原則。使用前要對操作臺面、器械等進行消毒,操作過程中要注意防止微生物污染。同時,要定期對細胞進行檢查,觀察其形態、生長狀態等,確保細胞株沒有發生變異或被污染。只有這樣,才能充分發揮細胞株在科研中的作用,獲得可靠的實驗數據。